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關(guān)于NEPA21的常見問題解答

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Questions Answers
Q1 NEPA21可以用于細(xì)菌或酵母的電轉(zhuǎn)化嗎? A1 不行,NEPA21是專用于動物細(xì)胞或植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染的,基于方波波形而設(shè)計,電壓控制精確且電刺激溫和,有利于提高轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞存活率。轉(zhuǎn)化細(xì)菌和酵母適宜使用基于指數(shù)衰減波波形的電穿孔儀,或其它能產(chǎn)生高壓脈沖的裝置。
Q2 什么是電穿孔脈沖(poring pulse)? A2 電穿孔脈沖是用于使細(xì)胞膜或核膜上產(chǎn)生小孔的脈沖電刺激,DNA或RNA等外源基因可以通過小孔進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)。這是用電穿孔法進(jìn)行基因?qū)氲幕驹?,大部分品牌的電轉(zhuǎn)染儀都設(shè)計有這個步驟。NEPA21除可以產(chǎn)生電穿孔脈沖外,還具備很多新功能,請參看Q3, Q4 和Q5
Q3 什么是導(dǎo)入脈沖(transfer pulse)? A3 導(dǎo)入脈沖用于將帶負(fù)電的核酸分子通過"電泳效應(yīng)"導(dǎo)入到細(xì)胞中,采用低壓和長脈沖時間的設(shè)計,充分利用"小孔修復(fù)"的這段時間,大大增加基因的轉(zhuǎn)染效率。這是NEPA GENE的專利技術(shù)。
Q4 為什么要進(jìn)行基因的反向?qū)? A4 在體外轉(zhuǎn)染(in vitro)尤其是懸浮狀態(tài)下轉(zhuǎn)染時,雙向的基因?qū)肽J?,可以大大提高轉(zhuǎn)染效率;在活體(in vivo)轉(zhuǎn)染時,雙向?qū)肽J剑梢詳U(kuò)大轉(zhuǎn)染區(qū)域。這是NEPA GENE的專利技術(shù)。
Q5 為什么設(shè)計多次脈沖? A5 多次脈沖可以提高穿孔效率和導(dǎo)入效率,從而提高轉(zhuǎn)染率。由于NEPA21的多次脈沖是采用"電壓衰減"的方式進(jìn)行的,不會給細(xì)胞造成額外的損傷。這是NEPA GENE的專利技術(shù),也是NEPA21獲得高轉(zhuǎn)染效率和高細(xì)胞存活率的重要原因之一。L
Q6 怎樣選擇in vivo, in ovo, ex vivo實驗用的電極? A6 請將你需要做的實驗告訴我們,我們會為您推薦合適的電極和提供相關(guān)的文獻(xiàn)(reference)、實驗方案(protocol)供您參考。讓華粵成為您的私人實驗顧問!
Q7 怎樣選擇合適的電轉(zhuǎn)杯耗材? A7 一般情況,我們推薦您使用2mm間隔的電轉(zhuǎn)杯,它適用的細(xì)胞數(shù)量范圍最廣,也是最多研究者使用的電轉(zhuǎn)杯型號。針對這個型號的電轉(zhuǎn)杯,我們可以提供的實驗方案(protocol)共享服務(wù)更多、準(zhǔn)確性更高。
Q8 NEPA21與其它品牌的電轉(zhuǎn)杯兼容嗎?或者,NEPA的電轉(zhuǎn)杯可以用于其它品牌的電轉(zhuǎn)染儀嗎? A8 理論上只要大小合適,電轉(zhuǎn)杯是通用的。但不同廠家使用的模具和材料有差異,因此電轉(zhuǎn)杯的電阻會有差別。當(dāng)您使用其他品牌的電轉(zhuǎn)杯來執(zhí)行我們?yōu)槟ㄗh的實驗方案(protocol)時,所取得的效果與使用NEPA GENE電轉(zhuǎn)杯的效果可能會有差別。同理,當(dāng)您將NEPA GENE的電轉(zhuǎn)杯用于其它品牌的儀器時,也需要對電轉(zhuǎn)染的參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。
Q9 NEPA21的轉(zhuǎn)染過程是否別的試劑輔助? A9 不需要,電轉(zhuǎn)染時只需使用您平時培養(yǎng)細(xì)胞用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(不含血清)。目前只有NEPA21能做到這一點。
Q10 為什么你們不將對應(yīng)于不同細(xì)胞或組織的轉(zhuǎn)染方案(protocol)在網(wǎng)頁中列出來? A10 不同的細(xì)胞類型所適用的轉(zhuǎn)染程序不一樣,即使是名稱、來源相同的細(xì)胞,在不同實驗室的培養(yǎng)環(huán)境下,細(xì)胞膜對電刺激的反應(yīng)亦可能不一致。因此,我們不建議死板的將protocol與cell type一一對應(yīng)。我們會根據(jù)您的細(xì)胞的具體情況,為您設(shè)計一套個性化的轉(zhuǎn)染方案(protocol)。多次實踐經(jīng)驗告訴我們,如果僅在網(wǎng)頁上給不同細(xì)胞羅列一個"標(biāo)準(zhǔn)程序",您在實際使用中很可能得不到網(wǎng)頁上所顯示的最佳轉(zhuǎn)染效果。